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stn沙门基因论文 沙门菌属stn基因LAMP在食品检验中的有效利用

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沙门菌能够引起严重的食物中毒,是一种人畜共患的病原菌,该类型细菌的疫病爆发以及流行已经受到了人类广泛的关注,针对沙门菌的检验方式更为先进,操作也更为简便.传统的检测方式一般以分离培养为主,结果较为准确,但是操作步骤繁琐,而且免疫学的敏感度较低,生物学的论文范文酶链反应(简称PCR)等敏感度较高,但需要更为先进的设备,因此很难得到大范围推广应用.LAMP,即环介导等温扩增法,采用新型的方式对核酸进行扩增,操作简单、特异性强,相对于其它方式,效果十分显著.

材料与方法

一般材料

2016年7至9月选择125份食品样本,包括冷冻生肉16份,生鲜肉16份,熟肉16份,非发酵类豆制品16份,米面16份,生水产品9份,冰淇淋9份,蔬菜沙拉9份,新鲜果汁9份,生食蔬菜9份.

阳性控制菌株:肠炎沙门菌.

检测方式

样本前增菌.根据《食品微生物学检验沙门氏菌检验》中相关标准,取25克标本,添加到无菌均质袋里,均匀拍打两分钟,在37℃的条件下培养8至10小时.冷冻产品需要在45℃下进行不超过15分钟的解冻.

分离培养法.轻柔晃动样本前增菌液,然后从增菌后的290份样本中选取1毫升,将其放入10毫升论文范文B增菌液中,在42℃下培养18至24小时.另外,再取1毫升放置于10毫升SC增菌液中,在37℃下培养18至14小时.再取1毫升食品标准增菌液,接种在BS平板以及XLD平板上,在37℃下培养18至24小时.选取3个可疑的菌落,分别接种在TSI、赖氨酸脱羟酶试验培养基、琼脂平板上,在37℃下培养18至24小时.一定时间的生化反应后,选取其中与沙门氏菌基本符合的,基于琼脂平板上获取可疑的菌落,与生理盐水混合制备成浑浊度适当的菌悬液,利用微生物系统进行自动鉴定.若BS与XLD平板上没有出现可疑菌落,则将BS平板继续置于37℃的环境中继续培养18至24小时.若结果仍然没有可疑菌落,则判定为阴性.若实际情况需要,可以进行血清学分型.

LAMP检测方式.获取食品标本前增菌液1毫升,以每分钟10000r的速率进行离心,两分钟后停止,将上清液去除,利用核算提取试剂盒将下层核算取出.同时,另外取出1微升上清液,将待验模板DNA制作出来.根据沙门氏菌检验标准设计出引物,检验125份标本的DNA,将标准反应体系作为判断指标.在65℃条件、80℃灭活酶下,持续60分钟的水浴.反应结束后,观察反应液,如颜色呈现绿色,则为阳性,若为无色或棕色,则为阴性.鉴定方式还可以采用电泳方式,阳性为最小片段大于100bp的特征性梯状.

统计学方式

利用SPSS15.0软件帮助分析,计数资料利用χ2检验,差异用P<0.05表示.

结果分析

经过检验结果的对比分析,LAMP的阳性率为11.2%,分离培养法为5.6%,该比较具有统计学意义(P<0.05).如表1:

讨论

沙门菌具有多种类型,能够对人、家畜、野生禽兽等产生不同形式的感染.感染沙门菌的人以及带菌者的粪便如果对食品造成污染,就会引起严重的事物中毒现象.沙门氏菌在能够引起食物中毒的细菌中常列榜首.环介导等温扩增法,简称LAMP,采用新型方式对核算进行扩增,在靶基因的六个区域内,设置四种特异引物,在链置换DNA论文范文酶的帮助下,将65℃保持30至60分钟,完成扩增.相较于常规的论文范文酶链反应(PCR),模板无需进行热变形、温度循环等过程,因此操作程序简化了许多,也能快速得到结果,特异性也比较强.LAMP的灵敏度也比PCR高,检测范围也得到了一定的扩宽,检测结果用肉眼即可观察到,在食品检测中具有很高的应用价值.陆续有专家对LAMP检测方式进行了一系列探讨.袁发浒、黄金海、李雪、田桢干等专家对LAMP检测步骤的建立、检测的应用等进行了深入的研究.通过他们的实践,结合近年来的理论研究再一次证明了LAMP的检测结果高于国际通过方法,由此可见,该方式更为快速,结果更为精确.

虽然细菌分离培养的方式现阶段的应用仍然比较广泛,但是其操作程序比较复杂,需要经过前增菌、分离、生化等诸多步骤,得到阴性检测结果通常需要大约4天的时间,检测沙门氏菌时利用该方式得出结果至少需要七天的时间,因此在急需检测结果的时候就不能使用了.另外,细菌的分离需要进行两次增菌后才能继续分离培养的方式,生化鉴定的程序十分复杂繁琐,并需要借助于微生物鉴定系统,经常出现血清分型价效低的问题,所用到的试剂不仅论文范文高,而且容易失效,鉴定所需要的机械设备也十分昂贵,不能广泛推广使用.LAMP方法在提取出核酸之后就能直接扩增,一个小时后即可完成扩增过程,经过24小时即可得出检测结果,肉眼直接就能观察,更加方便、快捷、直观.本文将LAMP检测与细菌分离检测的方式进行对比,对125份食品样本中的沙门菌进行检测.通过对结果的分析表明,这两种方式的检测结果中阳性率存在十分显著的差异,LAMP的阳性率为11.2%,细菌分离培养为5.6%,前者显著高于后者.

结语

由以上研究的结果对比可知,在食品沙门氏菌检验中应用LAMP方式,操作更加简便,结果也更能快速得到,结果更加精确,相较于细菌分离培养方式具有显著的优点,能够进行食品卫生的初步检验.但是该方式只能检测沙门氏菌的通用核酸,不能鉴定分型与分离菌株,因此可以将LAMP方式与分离培养法配合进行.

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